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    酶聯(lián)免疫吸附劑測定實驗基本原理：
    1.使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。
    2.使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原 或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
    3.在測定時，把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或 抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方 法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，后結(jié)合在 固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。
    4.加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量 與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性 或定量分析。
    由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測 定方法達到很高的敏感度。 
        
酶聯(lián)免疫DIY夾心法實驗技術(shù)指南：
1.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單 抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。
2.為了確定*信號和低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗 體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在 適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行 操作。
3.標準品的配制：對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書，注意每批的 細節(jié)。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的 細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復(fù)溶。
4.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列 稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試 劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5.為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標準品和標本。
6.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮 鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
7.當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相 干的Ig.

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