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今日主題:ELISA成功的原因重在點(diǎn)子上
更新時(shí)間:2016-09-27 點(diǎn)擊次數(shù):1700

   ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因有哪些?您的實(shí)驗(yàn)思路是怎樣的?ELISA試劑盒作為上海恒遠(yuǎn)主營且熱銷的產(chǎn)品之一,ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)問題必然是售后服務(wù)中的一大焦點(diǎn)。日前上午9時(shí),我公司展開2016酶聯(lián)免疫技術(shù)交流會(huì),會(huì)議主題也正是我今日資訊主題:ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因重在“點(diǎn)子”上。
    會(huì)中,我司技術(shù)總監(jiān)表示:從標(biāo)本的采集到實(shí)驗(yàn)操作步驟完畢,每一個(gè)流程都是影響實(shí)驗(yàn)的因素。當(dāng)然,這是在試劑盒質(zhì)量保證且正確保存的條件下。為什么說ELISA實(shí)驗(yàn)成功的原因重在“點(diǎn)子”上?只要每一步流程都能夠達(dá)到正確的“點(diǎn)”上,那么您定能夠做出的實(shí)驗(yàn)。
一、檢測(cè)標(biāo)本的收集:
    ①收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。
    ②血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血,高血脂標(biāo)本。
    ③標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
    ④標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-70℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融,3-6月內(nèi)檢測(cè)。
   在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行。
  檢測(cè)的樣本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的,-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
二、不斷學(xué)習(xí)ELISA操作技巧:
    1.操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。
    2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說明書一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
    3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流,造成孔問污染,導(dǎo)致假陰性或假陽性。
    4.要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯(cuò)誤。
    5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng),顯色液量不能過多,以免顯色過強(qiáng)。
三、操作指南:
操作指南:固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果
四、OD值的范圍:
    在ELISAzui后步驟中OD值的范圍也是有一定講究的,不容小覷。說到OD值范圍,我公司業(yè)務(wù)員在售后問題的處理過程中也常會(huì)有客戶咨詢其范圍是多少。其實(shí)是不一定的,我們以AβELISA為例,2以上就會(huì)偏飽和,變化不容易做出來,所以一般把model組控制在0.8-1.5,而control組的話基本跟空白差不多,不到0.1。
    所以,一般情況下我們會(huì)建議先做個(gè)標(biāo)曲以及樣品的梯度稀釋,然后選擇在標(biāo)曲中間位置的樣品稀釋度作為以后的參照稀釋度。
    同時(shí),也與使用的detector有關(guān),detector有自己的檢測(cè)范圍和線性范圍。如果實(shí)驗(yàn)室使用的儀器,說明書上說檢測(cè)范圍是0~4,線性范圍是0~3,但我們自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示的線性范圍是0~2OD。如果只檢測(cè)空白的沒有經(jīng)過處理的Elisa孔,大致在0左右。
   上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒提供專業(yè)的全程技術(shù)指導(dǎo)服務(wù)及免費(fèi)代檢測(cè)服務(wù),助您的實(shí)驗(yàn)一臂之力!另有好消息:黃金十月,BIM試劑盒將與各位親密互動(dòng),全場(chǎng)享5折優(yōu)惠,歡迎您關(guān)注我司*活動(dòng)動(dòng)態(tài)或。

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