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技術(shù)文章

Technical articles

2023
3-27

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)靈敏度高的原因
ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。ELISA試劑盒試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因及解決辦法分析：1選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2加樣可能原因：1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2）手工操...
2023
3-20

ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)異常的原因分析
ELISA實(shí)驗(yàn)是我們大家最常見的實(shí)驗(yàn),也是比較容易出問(wèn)題的實(shí)驗(yàn),可能你一不小心,你的整個(gè)實(shí)驗(yàn)便是無(wú)功能重來(lái)那!所以小編給您講解在使用ELISA試劑盒做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，有些細(xì)節(jié)若是做不好會(huì)出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)異常，或者效果不佳，那么你有想過(guò)是什么原因嗎？一、白板異常：顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無(wú)顏色。陽(yáng)性對(duì)照不顯色。1.試劑已過(guò)效期，或不同試劑盒組分混用（解決方式：檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)未過(guò)期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用）。2.錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯...
2023
3-13

綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96T0.2μg/L-9μg/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定綿羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型膠原α1鏈(COL1A1)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)水平。用純化的綿羊I型膠原α1鏈(COL1A1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入I型膠原α1鏈(COL1A1)，再與HRP標(biāo)記的I型膠原α1鏈(COL1A1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物...
2023
3-6

ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果為什么有時(shí)候會(huì)復(fù)測(cè)？
在ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中時(shí)常會(huì)出現(xiàn)復(fù)測(cè)現(xiàn)象即我們時(shí)常說(shuō)的"花板"現(xiàn)象，這種現(xiàn)象影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確判讀，對(duì)工作造成一定的不利影響，一旦出現(xiàn)“花板”，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須放棄，重新進(jìn)行，不僅浪費(fèi)物料和時(shí)間，而且還會(huì)出現(xiàn)樣本量缺少、交叉污染、報(bào)告延遲等一系列問(wèn)題。影響因素分析如下：一、標(biāo)本因素正確處理標(biāo)本，防止大規(guī)模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測(cè)，但血清的分離應(yīng)在抽血后等血液wan全凝固后再離心。二、試劑因素正確保存及使用有效試劑。使用過(guò)期試劑及...
2023
2-27

競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中，主要兩種計(jì)算方法
在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間，此時(shí)反應(yīng)最為敏感。競(jìng)爭(zhēng)法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽(yáng)性判定值法和抑制率法。a.陽(yáng)性判定值法與間接法和夾心法中的陽(yáng)性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計(jì)算公式中引入陽(yáng)性對(duì)照A值，現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒為...
2023
2-20

豬免疫球蛋白G2（IgG2）ELISA試劑盒說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用。使用目的：本試劑盒用于測(cè)定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白G2（IgG2）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬免疫球蛋白G2（IgG2）水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白G2（IgG2），再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白G2（IgG2）...
2023
2-13

ELISA測(cè)定的常用模式--競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原
大分子抗原因其具有兩個(gè)以上的抗原決定簇，而可用雙抗體夾心法測(cè)定，小分子半抗原如di高辛、茶堿等藥物以及T3，T4及睪酮等激素因其只有一個(gè)抗原決定簇，從而無(wú)法使用雙抗夾心方法測(cè)定，只能采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法測(cè)定。具體步驟如下：1．先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。2．同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)的小分子，溫育一定時(shí)間后洗板；此步中，待測(cè)樣本的小分子將與酶標(biāo)小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上特異抗體結(jié)合。3．加入酶底物，溫育顯色測(cè)定，顯色的強(qiáng)弱與待測(cè)樣本中的小分子含量成反比。這種測(cè)定模式...
2023
2-6

雙抗夾心 ELISA試劑盒的反應(yīng)時(shí)間
在保證ELISA有效檢測(cè)病原菌的前提下，快速、方便也是雙抗夾心ELISA的必要條件。雙抗夾心ELISA從加入待測(cè)抗原到得出結(jié)果，檢測(cè)大腸桿菌O157:H7共需要5h左右，而間接ELISA則需要7h(包被37℃，2h)或者17h(包被4℃guo夜)。本論文篩選出的雙抗夾心ELISA檢測(cè)大腸桿菌O157:H7省去封閉這一步驟。在間接ELISA測(cè)定抗原中，封閉一般是bi不可少的，因?yàn)榘徊煌瑵舛瓤乖灰欢梢詗an全覆蓋固相載體表面，如果不封閉，很可能使隨后加入的特異性抗體和酶標(biāo)二...

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